Заморозьте клітини в морозильному апараті з контрольованою швидкістю, знижуючи температуру приблизно на 1°C за хвилину. Крім того, помістіть кріопробірки з клітинами в ізопропанолову камеру та зберігайте їх при –80°C протягом ночі.
Цього можна досягти шляхом використовуючи преконфлюентні культури (культури з нижчою максимальною щільністю клітин) і змінюючи культуральне середовище за 24 години до заморожування. Швидкість охолодження може змінюватися, але як загальний орієнтир швидкість від –1 °C до –3 °C за хвилину буде прийнятною для більшості клітинних культур.
Найбільш поширеним заморожуючим середовищем є 90% FBS/10% DMSO. Для менш вибагливих клітин і для бюджетної культури тканин також можна використовувати 10% ДМСО в середовищі росту клітин.
загалом, повільне заморожування і швидке розморожування вважається основним правилом, якого слід дотримуватися при заморожуванні та подальшому відновленні клітин. Для оптимальної роботи в довгостроковій перспективі зберігайте кріогенні флакони в резервуарах з рідким азотом (від -135°C до -196°C).
Клітини слід заморожувати повільно 1°C/хв. Цього можна досягти за допомогою програмованого охолоджувача або помістивши флакони в ізольовану коробку, поміщену в морозильну камеру з температурою від –70 °C до –90 °C, а потім перемістивши їх у сховище рідкого азоту.
Використовуйте окрему морозильну камеру з температурою 0 °F або нижче для тривалого зберігання заморожених продуктів. Зберігайте термометр приладу в морозильній камері або морозилці, щоб перевіряти температуру.