Нагрійте буфер для елюції до 70°C перед нанесенням зразка на колонку вивільнить більше ДНК з мембрани, що призведе до вищих урожаїв. Дозволити буферу постояти на колонці протягом 5 хвилин перед центрифугуванням також може допомогти збільшити вихід.
Загалом, параметри, які можуть впливати на продуктивність вилучення, включають температура, тиск і співвідношення розчинника до вихідної сировини.
Під синім або ультрафіолетовим світлом обережно виріжте потрібні смуги ДНК (якщо використовуєте ультрафіолетове світло, дійте швидко, щоб уникнути надмірного перехресного зшивання ДНК). Витягніть ДНК зі смуг за допомогою набору для гелевої екстракції (Qiagen, кат. № 28704), елююючи 40 мкл води. Урожайність типова ~ 20 нг/мкл для продуктів ПЛР.
Шість порад для ідеальної екстракції гелю
- Повністю розтопіть агарозу. …
- Зведіть до мінімуму вплив УФ-променів. …
- Використовуйте найменшу можливу пробку з агарози. …
- Переконайтеся, що в елюаті немає етанолу. …
- Нагрійте буфер для елюції до 50°C для великих фрагментів. …
- Використовуйте рекомендовану кількість буфера для розчинення.
Збільшення або зменшення виходу екстракції Вихід обернено пропорційний розміру помелу; менший розмір зерна забезпечує більшу площу поверхні та швидше вилучення. Довший час варіння призводить до більшого врожаю. Каву за френч-пресом часто варять із грубого помелу, час заварювання становить 3–4 хвилини.