Пряма імунофлюоресценція / ІФ
- Підготуйте тканину або культуру клітин.
- Підготуйте зріз тканини або клітинну покривну губу.
- Промийте зразки двічі PBS.
- Закріпіть амплі 4% параформальдегієм у PBS протягом 15 хвилин при кімнатній температурі (Примітка: параформальдегіє токсичний, використовуйте лише у витяжній шафі)
- Аспіруйте фіксатор, двічі промийте PBS по 5 хв.
Протоколи – Імунофлуоресценція: загальна FFPE людська тканина Попередньо промийте зрізи тканин у PBS (забуферений фосфатом фізіологічний розчин, рН 7,4) протягом 30 хвилин. Промийте зріз тканини двічі протягом 30 хвилин у TBST (трис-буферний фізіологічний розчин, pH 7,4 з 0,05% Tween 20). Інкубуйте зріз тканини з блокуючим буфером протягом 30 хвилин.
Імунофлюоресценція (ІФ) є техніка, яка дозволяє візуалізувати практично багато компонентів будь-якої даної тканини або типу клітини. Ці широкі можливості досягаються за допомогою комбінацій специфічних антитіл, помічених флуорофорами. Отже, можливе застосування в дослідженнях і догляді за пацієнтами є численним.
Щоб виконати стандартну процедуру фарбування, спочатку зріз тканини необхідно депарафінізувати, а потім регідратувати перед нанесенням первинного антитіла. Потім наносять вторинні антитіла, кон’юговані з ферментом, і після додавання специфічного для ферменту субстрату можна візуалізувати специфічне фарбування.
Принцип імунофлюоресценції полягає в тому на основі зв’язування антиген-антитіло за допомогою флуоресцентної детекції. Різні антигени, такі як білки, глікани та малі біологічні та небіологічні молекули, виявляються та візуалізуються в клітинах або тканинах за допомогою флуорофорів.